Криоконсервация позволяет сохранить репродуктивный материал на месяцы и годы, временно остановив клеточные процессы при сверхнизкой температуре. Однако извлечь образец из криохранилища недостаточно. После размораживания эмбриолог должен удалить защитные вещества, вернуть клетки к обычным условиям и проверить, сохранили ли они необходимые свойства.
Яйцеклетки, сперматозоиды и эмбрионы реагируют на эту процедуру по-разному. Поэтому выражение «материал пережил размораживание» в каждом случае имеет свое значение. Для сперматозоида важны движение и строение, для яйцеклетки — целостность клетки, а для эмбриона — сохранность клеток и способность продолжить развитие.
Как размораживают репродуктивный материал
Перед замораживанием клетки обрабатывают криопротекторами — веществами, которые уменьшают повреждение при охлаждении. Во время размораживания их необходимо постепенно удалить. Резкая смена состава раствора может привести к перемещению воды через клеточную оболочку и повредить клетку, поэтому материал последовательно переносят через несколько специальных сред.
При витрификации особенно важна скорость согревания. Быстрый переход от температуры жидкого азота к более теплой среде снижает вероятность образования кристаллов льда. Затем образец выдерживают в инкубаторе или подходящей лабораторной среде, чтобы клетки восстановились после температурного перехода.
Весь процесс проходит под контролем эмбриолога. Оценку проводят не по внешнему виду контейнера и не по продолжительности хранения, а непосредственно после согревания. Даже при правильно выполненной криоконсервации часть клеток может не сохраниться, поэтому размораживание всегда связано с определенной биологической потерей.
Что происходит с яйцеклетками и сперматозоидами
Для замораживания обычно отбирают зрелые яйцеклетки, готовые к оплодотворению. После согревания эмбриолог проверяет целостность клеточной оболочки, состояние цитоплазмы и другие видимые признаки. Сохранившаяся яйцеклетка некоторое время находится в питательной среде, после чего ее можно использовать в программе.
Витрифицированные яйцеклетки оплодотворяют методом ИКСИ, когда один выбранный сперматозоид вводят внутрь клетки. Такой подход позволяет обойти возможные изменения внешней оболочки яйцеклетки после замораживания. Но сохранность клетки еще не означает, что оплодотворение обязательно произойдет и сформируется развивающийся эмбрион.
Сперму размораживают, после чего отделяют криопротектор и подготавливают образец. Часть сперматозоидов теряет подвижность или повреждается, поэтому показатели после размораживания обычно отличаются от исходной спермограммы. Лаборатория оценивает концентрацию, движение и наличие подходящих клеток, а затем отбирает наиболее активные.
Для ИКСИ может быть достаточно небольшого числа жизнеспособных сперматозоидов, тогда как для внутриматочной инсеминации требования к количеству подвижных клеток выше. Поэтому пригодность размороженного образца оценивают с учетом процедуры, для которой он предназначен.
Как оценивают эмбрионы после размораживания
После согревания эмбриона удаляют криопротекторы и помещают его в инкубатор. Эмбриолог оценивает:
● сколько клеток сохранилось;
● целы ли клеточные оболочки;
● соответствует ли внешний вид стадии развития;
● возобновилось ли деление;
● расправилась ли бластоциста после согревания.
Бластоциста во время витрификации уменьшается в объеме, а после возвращения в питательную среду обычно снова расширяется. Этот процесс называют реэкспансией. Он может начаться быстро или занять несколько часов, поэтому окончательный вывод не всегда делают сразу после извлечения из криохранилища.
Эмбрион не обязательно должен сохранить каждую клетку, чтобы остаться пригодным для переноса. Иногда повреждается небольшая часть, а оставшиеся клетки продолжают развиваться. Врач и эмбриолог учитывают общую картину и внутренние критерии лаборатории. При выраженном повреждении или отсутствии дальнейшего развития перенос могут не рекомендовать.
От чего зависит результат после размораживания
Наиболее важны исходное качество материала, метод замораживания, точность лабораторного протокола и опыт специалистов. Значение имеет и то, насколько стабильно поддерживалась температура при хранении и транспортировке. Само количество лет в криохранилище при соблюдении условий обычно менее важно, чем качество замораживания и согревания.
Размораживание показывает, сохранилась ли клетка, но не дает гарантии беременности. Сперматозоиду еще предстоит оплодотворить яйцеклетку, эмбриону — продолжить развитие и прикрепиться к эндометрию. На эти этапы влияют возраст пациентов, генетический потенциал клеток, состояние организма женщины и особенности программы ВРТ.
Поэтому статистику выживаемости нельзя напрямую приравнивать к вероятности рождения ребенка. Высокая сохранность материала говорит о качестве лабораторной работы, но итог зависит от всей последовательности лечения.
Если вам необходимо подобрать замороженные донорские яйцеклетки или сперму для программы ВРТ, обратитесь в криобанк «Криоцит». Специалисты расскажут об имеющемся биоматериале, его подготовке и порядке передачи в клинику.
